洁净车间灭菌方法有多种：紫外线灭菌、化学熏蒸、臭氧灭菌等；这里简单介绍臭氧灭菌后对洁净车间沉降菌的检测":
A:操作方法：对洁净车间用食品厂臭氧机灭菌1小时后进行沉降菌检测
B:名称：洁净区微生物检测操作规程
C:关键词：洁净区、食品厂臭氧机、车间臭氧机、微生物检测
D:目 的：寻得优质食品厂臭氧机、车间臭氧机厂家 并规范洁净区微生物检测
E:原理：臭氧灭菌技术
F:适用范围：100级、1万、10万、30万级洁净区环境。
1. 沉降菌检测
1） 在万级洁净区内的关键操作点和洁净室内每周检测一次沉降菌和浮游菌；在10万级洁净区内其检测频次为每月检测一次。30万级每季度检测一次沉降菌。
2） 由微生物检测员按《养基的配制操作规程的要求配制肉汤琼脂培养基，培养皿使用Φ90mm×15mm，于121℃湿热灭菌20分钟，取出备用。
3） 做好洁净区消毒工作，开启洁净区净化空调系统，正常运行不少于30分钟；对单向流如100级的净化工作台和层流罩要在净化系统运行10min后开始。
4） 静态测试在除测试人员外，室内无生产人员的情况下进行，动态测试在已处于正常生产状态下进行。
5） 采样点布置选用对角线法，要求布置地面四个方向，工作线上左右，关键设备顶上放置一个。
6） 万级、10万级、30万级的*少采样点数可按下表确定。
面积m2 洁净度级别10000 100000/300000
<10 2 2
≥10~<20 2 2
≥20~<40 2 2
≥40~<100 4 2
≥100~<200 10 3
在满足*少测点数的同时，还宜满足*少培养皿数，见下表
洁净度级别 所需Φ90mm×15mm（以沉降0.5h）
100 14
10000 2
100，000/300,000 2
7） 百级区只有净化工作台下的局部范围，其面积小于10m2，因此百级区取样点至少为3个。
8） 测试人员按洁净室级别规定的程序更换洁净服进入洁净区；静态测试时，室内人员不得多于2人。
9） 将制备好的肉汤琼脂培养基按采样点布点位置离地0.8～1.5m处放置，打开培养皿盖，暴露30分钟，检测人员及时填写记录，记录房间温湿度，压差及测试状态。
10） 盖好皿盖，将培养皿倒置于恒温培养箱内，在30～35℃中培养48小时，并用3只培养皿作对照。
11） 用透射光于培养皿背面或正面仔细观察平皿上所有菌落数，要注意菌落与培养基沉淀物的区别，然后用5～10倍放大镜检查有否遗漏。
12） 计算平均菌落数 =（M1＋M2……＋Mn）／n，式中 M1：1号培养皿菌落数，M2：2号培养皿菌落数，n： 培养皿数。
13） 用平均菌落数判断洁净室空气中的微生物， 洁净区的平均菌落数（静态测试）：100级≤1个/皿，万级≤3个／皿，10万级≤10个／皿，30万级≤15个／皿。
14） 如超过标准，则必须对此区域重新消毒，重新采样两次，测试结果均须合格；否则要向质量管理部经理通报，并采取相应的措施。
15） 检测人员必须向QA部门发“洁净级别检测记录”，取样和微生物培养及检测人员均要在记录上签名，QA部门主管审核，记录由质量管理部保存三年。
2. 浮游菌检测
1） 对万级和10万级洁净区要进行浮游菌的检测，在万级区内的关键操作点和洁净室内每周检测一次，10万级洁净区内其检测频次为每月检测一次。
2） 浮游菌取样使用浮游菌采样器，采样器必须要有流量计和定时量，并按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性。
3） 采样器进入被测房间前要先用消毒剂灭菌，用于100级洁净室的采样器*好是一直放在房间内；采样时使用规定为Φ150mm×15mm培养皿。
4） 由微生物检测人员按《培养基的配制操作规程》的要求配制营养琼脂培养基，于121℃湿热灭菌20分钟，取出备用。
5） 浮游菌取样与沉降菌一样可分为静态测试和动态测试两种状态；各种洁净度的采样点数目和*小采样量如下表所示。
浮游菌取样点数目及*小采样量
洁净度级别 面积m2 *少采样点 *小采样量（L/次） 验证 监测 验证 监测
100 ＜10 3 1000 600
10000 ＜40 2 500 400
100000 ＜100 2 100 50
6） 采样点布点位置离地0.8～1.5m处放置，送风口测点位置离开送风面30cm左右；可在关键设备或关键工作活动范围增加测点；采样点的布置与5）相同。
7） 对单向流如l00级净化工作台，测试要在净化空调系统正常运行不少于l0min后开始；对非单向流，如缓冲室、培养室，测试要在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
8） 采样者必须穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手要用消毒剂消毒；培养皿表面必须严格消毒。
9） 采样口及采样管在使用前必须高温灭菌，要用消毒剂消毒采样器的顶盘，转盘以及罩子的内外面；对采样管的外壁和内壁进行消毒后，要将管中的残留液倒掉并晾干。
10） 仪器经消毒后先不放入培养皿，先接通电源，启动真空抽气泵抽气不少于5min，使仪器中的残余消毒剂蒸发。
11） 调好流量，转盘转速，已知采样器的流量（L/min ），设定采样时间（min），相乘即采样量（L）；关闭真空泵。
12） 检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用，放入培养皿，盖上盖子后调节采样器缝隙高度。
13） 对于单向流或逆风口，采样器采样管口朝向应正对气流方向，对于非单向流采样管口向上，布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口lm以上。
14） 除百级区外，在其他洁净室采样时，要在送风口和关键部位各进行一次采样，每个采样点只采样一次。
15） 置采样口于采样点后，开启采样器，采样时，测试人员要站在采样口的下风侧，静态测试时，室内人员不得多于2人。
16） 采样结束后取出培养皿，盖上皿盖并编号，注意防止采样管对样本的污染；要用消毒剂喷射罩子的内壁和转盘，将采样过程记录在“洁净级别检测记录”上。
17） 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中30℃~35℃培养48h；每批培养基可选3只培养皿作对照培养，检验培养基本身是否污染。
18） 用肉眼直接计数，标记或菌落计数器上点计，然后用500倍放大镜检查，有否遗漏，若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
19） 浮游菌评定标准：100级≤5/m3，万级≤100/m3，10万级≤500/m3
20） 微生物检测人在“洁净级别检测记录”上记录检测数据，并交QA部门主管审批，每个测点的浮游菌平均浓度必须低于设定的洁净度标准的规定。
21） 若某测点的浮游菌平均浓度超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新取样两次，两次测试结果必须合格；否则要向质量管理部经理通报，并要采取相应的措施。
车间净化无菌级别请参照国家消毒标准。
